2021-08-31
叠颈辞肠丑谤辞尘30+氨基酸分析仪氧化水解法检测玉米胚芽粕中氨基酸
一、样品前处理
1、所用试剂
必须使用重蒸馏水或与之等质的水（电导率＜10μ蝉）
1、1 双氧水,30%
1、2 甲酸，98-100%
1、3 苯酚：须重蒸
1、4 偏重亚硫酸钠
1、5 氢氧化钠
1、6 盐酸，ρ＝1.18g/ml
1、7 水解剂：6mol/l 的HCL，1L含1g苯酚：
加1驳苯酚（3.3）到492尘尝盐酸(3.7)中，然后用水定容至1尝
1、8 20种氨基酸标准品
2、标样配置
氨基酸混合标准储备液：称取上述各氨基酸标样使用PH2.2的Load Buffer配置成2.5umol/L的储备液备用。
取氨基酸混合标准储备液与PH2.2的Load Buffer以1:9的比例配置成0.25umol/L的标准液。
3、前处理设备
1) 天平
2) 水解管
3) 量筒
4) 无油真空泵
5) 干浴水解、浓缩仪
6) 移液管
7) 0.45um滤膜
4、 样品制备（参考欧盟饲料指令98/64/EC ）
1、样品的准备
粉碎样品，通过0.5尘尘的筛孔。高水分的样品粉碎前必须低于50℃鼓风干燥或者冷冻干燥。高脂肪含量的样品粉碎前必须用轻质石油（3.12）脱脂。
2、氧化
从准备好的样品中称取约0.1~1克样品，准确到0.2mg，于100 ml带螺纹盖子的瓶子中，称取的样品应该含有大约10mg氮，水分不能超过100mg。将瓶子放于冰水浴中冷却至0℃，加5ml氧化试剂（过甲酸苯酚），用带弯头的玻璃刮勺混合。用空气密封膜将瓶子和刮勺一起密封，密封后一起放入0℃冰箱的冰水浴中，放置16小时。之后，从冰箱中取出，加0.84克偏重亚硫酸钠（3.4）来分解过量的氧化试剂。
3、水解
加入25毫升盐酸-苯酚溶液, 然后将反应瓶放在烘箱中，温度控制在110摄氏度，旋松帽子（防止玻璃瓶子破裂），水解1小时。然后快速旋紧瓶塞（戴手套和护眼罩）将其继续在烘箱110摄氏度下水解23小时。
4、加入内标并且调节辫贬值到2.20
当水解反应结束后，将反应瓶从烘箱中取出，并且打开瓶口（戴手套和护目镜）。冷却后用定量加样器准确加入15.00克(15毫升)正亮氨酸标准溶液，混合并且转移水解溶液到250毫升的塑料烧杯中。加入大约125毫升柠檬酸缓冲液和19毫升氢氧化钠水溶液,将实验烧杯放入到样品容器中用氢氧化钠水溶液将溶液调节到pH为正好2.20。
转移一部分溶液（不需要全部）到50毫升有盖子的塑料瓶中。可以马上测定或者放入冰箱等到分析的时候测定。
二、分析方法描述（Biochrom 30+）
氨基酸分析仪分析方法参数：
1) 色谱柱：Biochrom Na型阳离子交换树脂柱，4.6?20cm
2) 分离程序：
3) 运行时间：分析时间65min
4) 反应单元温度：135°C。
5) 检测波长：570nm、440nm同时检测。
叁、外标法定量
附、玉米胚芽粕分析图谱
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